Пцр на вирус эпштейна барра расшифровка: Анализ на Эпштейна-Барра: расшифровка, результаты – Анализ на вирус Эпштейна-Барр — диагностика монокулеза и рака

Содержание

Анализ на Эпштейна-Барра: расшифровка, результаты

Важную роль в диагностике герпеса 4 типа и инфекционного мононуклеоза медики отводят специфическим анализам, которые помогают выявить ДНК вируса или уникальные антитела в биоматериале пациента. К основным видам лабораторных исследований, применяемых для выявления вируса Эпштейна-Барра в организме человека, относятся иммуноферментный анализ (ИФА) и ПРЦ-диагностика. Рассмотрим подробнее суть обоих методов и особенности их проведения.

Иммуноферментный анализ на ВЭБ

ИФА — это исследование (анализ) венозной крови пациентов на антитела к вирусу Эпштейна-Барра. В результате диагностики в крови пациентов с ВЭБ обнаруживаются иммуноглобулины вида IgG или IgM (всего их 5видов) к одному из 3 антигенов вируса (раннему, капсидному или ядерному).

Проводят анализ в иммунологической лаборатории, где у пациента берут порядка 10 мл крови из вены. Далее биоматериал оставляют при комнатной температуре на четверть часа, в течение которых кровь сворачивается. Сгусток аккуратно отделяют от жидкой части. Жидкость центрифугируют и получают чистую сыворотку (серум) крови. Именно ее и подвергают дальнейшему исследованию.

Идея метода возникла на основании данных о том, что в нашем организме вырабатываются специфические антитела к каждому из видов вирусов и бактерий, проникающих в организм извне. Организм распознает в них чужака и уничтожает при помощи уникальных антител, которые накрепко сцепляются с антигеном.

Суть анализа ИФА основывается именно на этой реакции. Антитела с прикрепленными к ним метками соединяются с антигенами. На метки наносится вещество, которое при реакции со специальным ферментом изменяет окраску образца. Чем больше таких «цепочек», тем интенсивнее цвет биоматериала.

Иммуноферментный анализ может проводиться тремя методами:

  • Прямой ИФА. Исследуемую жидкость помещают в лунки и оставляют примерно на полчаса, чтобы антигены могли прикрепиться к стенкам лунки. К сорбированным антигенам добавляют жидкость с помеченными антителами. По истечении нужного времени (от получаса до 5 часов), когда антитела обнаружили и связались с антигенами, жидкость сливают, лунки аккуратно промывают и добавляют в них фермент. Методом колоризации определяют концентрацию вируса в единице крови.
  • Непрямой ИФА. При этом способе к сорбированным на поверхности лунок антигенам добавляют исследуемую сыворотку крови и меченные антитела. В результате получают 2 вида связок, часть из которых получается помеченной. Результат зависит от концентрации антигенов в исследуемом образце. Чем больше немеченных антител, тем меньше соединений, помеченных ферментом.

Далее к промытому составу добавляют специальный реагент, по которому и определяют ферментативную активность комплексов антиген-антитело.

  • «Сендвич». Отличается от непрямого метода тем, что изначально на поверхности сорбируют не антигены, а антитела. К ним добавляют раствор, содержащий исследуемые антигены. После промывки носителя добавляют антитела с ферментативными метками. Излишек антител опять удаляют и при помощи перекиси водорода получают окрашенную субстанцию, которую изучают спектрометрическим методом.

Данный вид анализа позволяет не только выявить специфические антитела и определить концентрацию антигенов, но и уточнить стадию заболевания. Дело в том, что разные антигены вируса Энпштейна-Барра появляются на различных этапах герпетической инфекции, а значит и антитела к ним вырабатываются в определенном периоде болезни.

Так, антитела IgG к раннему антигену (IgG EA) появляются в крови спустя 1-2 недели после заражения, когда болезнь находится в острой стадии или стадии реактивации вируса. Исчезают иммуноглобулины этого типа через 3-6 месяцев. При хроническом течении вирусной инфекции таких антител особенно много, а при атипичной форме они отсутствуют вообще.

Антитела IgG к капсидному антигену (IgG VCA) также появляются рано, в течение первых 4-х недель болезни, но больше всего их определяется ко второму месяцу инфекции. В острой фазе они обнаруживаются у большинства пациентов, но у детей они могут и не появляться. При хроническом течении болезни, особенно в периоды реактивации вируса, количество IgG VCA  особенно велико. Эти антитела у человека в крови остаются навсегда, как и сам вирус, что говорит о сформировавшемся иммунитете к инфекционному возбудителю.

Антитела IgM к капсидному антигену (IgM VCA) могут появиться еще до появления первых признаков болезни. Особенно велика их концентрация (титры) в первые 6 недель болезни. Этот вид антител характерен для острой инфекции и реактивации хронической. Исчезают IgM VCA спустя 1-6 месяцев.

Антитела IgG к ядерному гену (IgG EBNA) могут говорить о том, что человек ранее напрямую столкнулся в герпетической инфекцией. В острой фазе заболевания они выявляются крайне редко, обычно появляясь в период выздоровления (на 3-10 месяц). В крови их можно обнаружить спустя еще несколько лет после перенесенной инфекции.

Выявление отдельных антигенов не дает полной картины заболевания, поэтому анализы на разные антитела должны проводиться в совокупности. Например, если присутствуют лишь IgM VCA, а IgG EBNA не обнаруживаются, речь идет о первичной инфекции.

Увы, для выявления первичной герпетической инфекции или врожденной патологии иммуноферментного анализа зачастую недостаточно. В последнем случае антитела могут вообще не выявляться. В качестве подтверждающего теста при первичном заболевании используют молекулярное исследование крови или другого биологического материала на вирус Эпштейна-Барр.

ПРЦ-анализ на вирус Эпштейна-Барра

Данный анализ проводят на этапе острой первичной инфекции, в противном случае его результат будет некорректным.

Суть метода ПРЦ (полиразмерной цепной реакции) сводится к тому, что каждый инфекционный возбудитель имеет свой набор генов, заключенный в молекуле ДНК. ДНК возбудителя содержится во взятом для исследования биоматериале в небольших количествах (сами-то вирусы имеют микроскопические размеры), так что оценить ситуацию очень сложно. Зато если провести специфическую реакцию количество генетического материала заметно увеличится, что даст возможность назвать возбудителя болезни по имени.

При помощи одноразовых инструментов берут материал для молекулярного исследования, который помещают в специальный аппарат для проведения анализа. Прибор представляет собой термостат со специальной программой – термоциклер или амплификатор. В аппарате несколько десятков раз прокручивается полный цикл ПРЦ (порядка 2-3 минут), который имеет 3 этапа:

  • Денатурация (при температуре 95 градусов происходит рассоединение нитей ДНК).
  • Отжиг (при температуре 75 градусов в исследуемый материал вводятся специально заготовленные «затравки» для ВЭБ, которые прикрепляются к ДНК вируса).
  • Удлинение или размножение генетического материала (к затравке при температуре 72 градуса присоединяется специальный фермент, который воссоздает новую цепочку ДНК, увеличивая тем самым количество генетического материала вдвое).

Если полный цикл полиразмерной реакции прогнать 50 раз, количество материала увеличится в 100 раз. А значит, выявить возбудителя будет намного проще.

Анализ на вирус Эпштейна-Барра у ребенка

Как мы уже знаем, вирус Эпштейна-Барра может стать причиной развития многих заболеваний. Попав однажды в организм человека, он остается его постоянным жителем, и только слаженная работа иммунной системы не позволяет ему активно паразитировать внутри клеток.

Почти 95% взрослого населения планеты живет с ВЭБ внутри, и большинство из них познакомились с вирусом еще с раннего детства. Кому-то он достался в наследство от матери, а другие получили вирус от родителей и родственников, спешащих к ребенку с поцелуями, или воздушно-капельным путем в детском саду или школе (инфекционные заболевания там обычно приобретают «вселенские» масштабы).

Маленьким деткам вообще свойственно все тянут в рот, а большее число вирионов обнаруживается именно в слюне. И если в саду одну и ту же игрушку облизывают несколько детей, пока воспитатели заняты своими делами, то неудивительно, что вирус так активно распространяется в больших коллективах малышей.

ВЭБ можно спокойно назвать болезнью детей и молодежи, ведь в подростковом возрасте уже половина детей имеют вирус в организме (а к 30 годам и порядка 90% взрослых). Болеют дети в разные возрастные периоды по-своему. До года, пока ребенок активно не общается с людьми, вероятность заболеть у него невелика. Малыш старше года, даже если он не пошел в детский сад, становится более общительным, играет со сверстниками на улице, совершает с мамой активные походы по магазинам и т.д., и вероятность захватить вирус становится намного выше.

Но это не повод запирать ребенка в 4-х стенах. В возрасте 1-3 лет болезнь в подавляющем большинстве случаев протекает без каких бы то ни было симптомов, разве что с незначительным поднятием температуры и легким насморком, напоминая простуду. Получается, что чем раньше ребенок знакомится с вирусом, тем легче протекает такое знакомство.

Нехорошо, если ребенок переболеет без появления в крови антител IgG VCA, что может говорить о том, что иммунитет к вирусу не сформировался, и возможна реактивация вируса, как только иммунная система даст слабину. Причиной является, скорее всего, несовершенство иммунной системы маленьких детей, которая находится в стадии формирования несколько лет.

Школьная жизнь дает еще больше предпосылок к заболеванию, особенно в подростковом периоде, когда молодежь активно практикуется в поцелуях. Но у детей старше 3 лет болезнь реже имеет бессимптомное лечение. В большинстве случаев врачи сталкиваются с инфекционным мононуклеозом со свойственными ему симптомами.

Несмотря на то, что патология может иметь длительное течение (порядка 2 месяцев), она не столь опасна и не требует применения серьезных препаратов. Врачи назначают противовоспалительные и противовирусные средства, если присоединяется бактериальная инфекция, обращаются за помощью к антибиотикам. Кстати, пенициллины в этом случае применять не рекомендуются в связи с тем, что они могут провоцировать появление кожной сыпи.

Не надо думать, что если ребенок или подросток заболел инфекционным мононуклеозом, значит, у него в организме поселился вирус Эпштейна-Барра. У болезни есть и другие не столь частые возбудители, например, цитомегаловирус (вирус герпеса 5 типа). Чтобы понять, с чем врачи имеют дело, назначают анализ на вирус Эпштейна-Барра, а при необходимости и другие лабораторные исследования.

Так же верно и то, что инфекционный мононуклеоз не является единственным проявлением ВЭБ в детском возрасте. Есть и другие заболевания, ассоциированные с этим возбудителем, но в нашем регионе они встречаются редко.

Так лимфома Беркитта (а именно ей ВЭБ обязан своим выявлением) встречается преимущественно у детей африканских стран, очень редко в Америке, еще реже в Европе (и то лишь на фоне СПИДа). Челюстная опухоль с поражением лимфоузлов, почек и других органов обнаруживается у малышей 3-8 лет.

Назофарингеальный рак, значительная часть иных лимфом, волосатая лейкоплакия рта – все это проявления ВЭБ на фоне сильно сниженного иммунитета, что бывает при ВИЧ-инфекции и ее более поздней стадии СПИДа.

Врожденный иммунодефицит и присоединение вируса Эпштейна-Барра – опасная смесь, которая может привести к развитию у ребенка пролиферативного синдрома. В этом случае увеличение количества В-лимфоцитов приводит к появлению гранулята во многих органах, что не дает им нормально функционировать. Это болезнь с высоким уровнем летальности, но на фоне нормального иммунитета она не развивается.

Можно сказать, что в детском возрасте вирус Эпштейна-Барра опасен в основном при иммунодефиците из-за развития различных осложнений. В большинстве случаев все ограничивается инфекционным мононуклеозом. И хотя особого лечения он не требует, врачи предпочитают все же установить природу возбудителя болезни, для чего ребенку и назначают общий анализ крови, иммуноферментный анализ и ПРЦ.

Поскольку в детском возрасте имеет место в основном первичная инфекция, то вполне можно ограничиться лишь ОАК и ПРЦ, который достаточно информативен при впервые выявленном заболевании.

trusted-source[20], [21], [22], [23], [24], [25], [26], [27], [28], [29], [30], [31]

ПЦР на вирус Эпштейна-Барр (ДНК вируса в крови): сдача слюны, расшифровка

Анализ на вирус Эпштейна-Барр производится двумя способами: ИФА, который выявляет антитела к антигенам и устанавливает форму развития инфекции (хроническую, острую, бессимптомную), и ПЦР (полимерная цепная реакция). Метод ПЦР на вирус Эпштейна-Барр исследует ДНК клеток вируса, определяет его наличие или отсутствие у человека. ПЦР рекомендуется для обследования детей, так как организм ребёнка ещё не успевает выработать антитела, а также, когда результат ИФА вызывает сомнение.

 

Особенности проведения ПЦР

Вирус Эпштейна-Барр (ВЭБ) относится к самым распространённым заболеваниям, его носителями являются почти 65% детей до трёх лет, а также 97% взрослых. Это одна из разновидностей герпесвирусов (4-го типа), которая после заражения вызывает заболевания:

  1. Лимфоретикулярной системы: изменение лимфатических узлов, поражение печени и селезёнки.
  2. Иммунной системы: поселяется внутри В-лимфоцитов, нарушает их функциональные свойства, что вызывает иммунодефицит, вызывает разрушение клеточного звена иммунитета.
  3. Эпителиальных клеток дыхательных и пищеварительных органов: проявляется респираторным синдромом, а именно кашлем, одышкой, «ложным крупом», возможно поражение внутренних органов.

Считается, что ВЭБ иногда является провоцирующим фактором развития злокачественных новообразований: лимфомы Бёркитта, рака носоглотки, лимфогранулематоза, хотя окончательных доказательств этого нет. Кроме того, наблюдается аллергия почти у каждого четвёртого носителя хронической ВЭБ-инфекции.

Вирус сохраняется в организме всю жизнь, он вызывает хроническую инфекцию, которая обостряется при возникновении благоприятных для неё условий.

Что такое ПЦР

Известны две разновидности ВЭБ, но серологически они ничем не отличаются. Заражение возможно от носителя в конце инкубационного периода, весь срок протекания болезни, в течение полугода со дня выздоровления. У отдельных больных имеется способность время от времени выделять вирус, то есть становиться его носителями даже спустя многие месяцы после инфицирования.

ПЦР-диагностика предполагает выявление ДНК вируса путём использования методов молекулярной биологии. Для исследования используются особые ферменты, которые многократно копируют фрагменты ДНК и РНК клеток. Затем полученные фрагменты сверяются с базой данных, выявляется присутствие ВЭБ и его концентрация.

Материалом при определении ДНК вируса Эпштейна-Барр становятся слюна, слизь из ротовой или носовой полости, кровь, пробы спинномозговой жидкости, соскобы клеток урогенитального канала, моча.

Целесообразность выбора того или иного материала определяется врачом. Обычно для ПЦР предпочтительна кровь, которую забирают в колбу с раствором ЭДТА (6%).

У маленького ребёнка иммунитет находится в стадии установления, поэтому метод определения антител к ним не применяется, для детей используется ПЦР.

Результат ПЦР часто бывает положительным, поэтому требуется дифференцировать больного человека и вирусоносителя, для этого применяется анализ с различной чувствительностью:

  • до 10 копий на одну пробу – для носителей;
  • до 100 копий – при активном вирусе Эпштейна-Барр.

ПЦР даёт очень высокую степень правильности результата, но особенность этого анализа состоит в том, что он информативен только в период репликации, потому присутствует 30% ложноотрицательных результатов по причине отсутствия репликации на момент анализа.

В период беременности считается обязательным несколько раз сдать анализ ПЦР, если вирус впервые выявлен уже после наступления беременности, для своевременного обнаружения реактивации вируса.

Подготовка к сдаче анализа

При сдаче анализа на вирус Эпштейна-Барр требуется исключить все факторы, которые могут исказить результат ПЦР:

  1. Биологический материал необходимо брать утром натощак.
  2. Накануне проведения ПЦР рекомендуется отказаться от плотного ужина. Лучше немного перекусить за 9 часов до времени взятия биоматериала.
  3. За трое суток до сдачи анализа исключить алкоголь, энергетические напитки, жирную, сладкую или мучную пищу.
  4. За день до анализа исключить чай и кофе, газированные напитки.

Перед анализом маленьким детям дают кипячённую воду (до 200 мл в течение получаса). Не рекомендуется принимать лекарства, начиная за 10-14 дней до ПЦР, но если они необходимы по жизненным показаниям, то их названия нужно предоставить врачу, который будет расшифровывать анализ.

Диагностика вируса Эпштейна-Барр (ВЭБ): анализ крови, ДНК, ПЦР, печеночные пробы

Когда ПЦР будет готов

Известно несколько методик ПЦР-диагностики. Но самым достоверным и широко используемым стал анализ в реальном времени, при котором почти никогда не бывает ложноотрицательных показателей и доступен быстрый результат.

Результат ПЦР можно будет получить через несколько часов или несколько дней, все зависит от лаборатории и экстренности ситуации. Средняя продолжительность ожидания результата 1-2 дня.

Расшифровка ПЦР при вирусе Эпштейна-Барр

Самыми первыми причинами для назначения ПЦР являются превышение лейкоцитов, тромбоцитов и понижение нормы эритроцитов и гемоглобина крови. При выявлении таких показателей пациенту назначается дополнительная диагностика — ПЦР.

Результат исследования бывает положительным или отрицательным. Положительный результат ПЦР свидетельствует, что сдавший анализ человек — носитель ВЭБ, хотя его наличие не доказывает того, что присутствует инфекция в острой или хронической форме.

Это доказывает то, что ВЭБ когда-то проник внутрь организма, так как герпес характеризуется тем, что после первичного попадания в организм его уже ничем нельзя вывести из него.

Серология, ИФА, ПЦР при вирусе Эпштейна-Барр. Положительный и отрицательный результат

Отрицательный результат ПЦР обнаруживается, если человек не сталкивался с ВЭБ и не содержит его в своём организме.

Если требуется не только выявить присутствие вируса, но и определить стадию и форму заболевания, то назначается ИФА, анализ на антитела к антигенам ВЭБ, в ходе которого исследуются:

  • антитела IgM VCA к капсидным антигенам вируса Эпштейна-Барр;
  • IgG VCA — к ранним антигенам.

Присутствие и тех и других показывает, что заболевание находится в острой форме, потому что они исчезают в течение 4–6 недель после начала болезни.

ПЦР-диагностика считается молодым методом, но при этом достаточно достоверным. Выявить присутствие вируса возможно даже при наличии только одной молекулы днк-вируса. Ввиду высокой точности данный вид обследования считается эффективным способом выявить герпесвирус и проследить за ходом лечения. При этом ПЦР требует высокотехнологического оборудования с многоуровневой системой контроля и подготовленных специалистов.

Антитела к вирусу Эпштейна-Барр IgG положительный: что означает, расшифровка анализов

Вирус Эпштейна – Барр (ВЭБ) это один из возбудителей семейства герпесвирусов. Он передаётся несколькими путями:

  • воздушно-капельным,
  • контактно-бытовым, через поцелуи и общую посуду,
  • при переливании крови или пересадке органов,
  • во время беременности и родов от больной матери к ребенку.

Способ заражения

После попадания в организм вирус в первую очередь поражает слизистые рта и носа. Затем он проникает в кровоток и распространяется по всему организму. Его главное отличие от остальных видов герпеса – сохранение клетки и стимулирование роста аналогичных клеток.

В качестве ответной реакции иммунная система уничтожает зараженные клетки при помощи Т-лимфоцитов. Из-за этого процесса увеличиваются в размерах лимфатические узлы.

Если иммунитет человека слаб, то ВЭБ переходит в хроническую или скрытую форму, поражая при этом слюнные железы, печень и селезенку. Если же человек ранее болел ветрянкой, то в его организме присутствуют антитела, реагирующие на присутствие вируса и частично подавляющие его. Но такие случаи происходят редко. Поэтому заражение приводит к инфекционному мононуклеозу, который успешно лечится.

Выработанные антигены к ВЭБ удерживают его внутри зараженных В-лимфоцитов. И большую часть пребывания в организме он находится в латентном состоянии. Ослабление иммунитета приводит к рецидиву заболевания и превращает человека из пассивного носителя вируса в активный источник инфекции.

Заболевания и их симптомы

Основная вызываемая ВЭБ, это инфекционный мононуклеоз. По симптомам он очень похож на простуду или ангину. Для него характерно постепенное повышение температуры, боль в мышцах, горле, общее недомогание, отсутствие аппетита.

В результате активирования вируса возникают тяжелые заболевания нервной системы: менингит, энцефалит, менингоэнцефалит. Они могут сопровождаться сыпью в виде папул, покраснений, небольших подкожных кровоизлияний. Если терапия подобрана верно и в нужное время, то эти осложнения проходят бесследно.

ВЭБ поражает лимфатическую ткань. Этот процесс носит название полиаденопатии. Главным симптомом этого заболевания является значительное увеличение лимфатических узлов, находящихся на шее, в области ключицы, в паху. Воспаление сопровождается болью.

Вирус также может инфицировать гланды и вызвать ангину, которая проявляется с характерными симптомами:

  • высокая температура,
  • гной на миндалинах,
  • общая интоксикация организма,

Также может проявиться болезнь Ходжкина, в результате которой возникают злокачественные образования (опухоли) в лимфатических узлах, сопровождающиеся тяжелым отравлением продуктами распада воспаленных тканей организма, сильными головными болями, слабостью и быстрой утомляемостью. Близкие узлы могут объединяться между собой в более крупные новообразования.

Подтверждением отсутствия иммунитета может стать и волосатая лейкоплакия. Сопровождается она образованием в ротовой полости белых наростов, со временем преобразующихся в бляшки.

Кроме этих заболеваний ВЭБ вызывает множество других:

  • генерализованная инфекция на фоне ВИЧ/СПИД,
  • системный гепатит,
  • заражение или рак крови,
  • синдром хронической усталости,
  • раковые опухоли органов пищеварения верхнего круга и ротовой полости,
  • артрит,
  • сахарный диабет,
  • рассеянный склероз,
  • аллергия.

Способы диагностики и расшифровка результатов

Для определения в организме ВЭБ используют несколько видов анализа крови:

  • общий,
  • биохимический,
  • иммуноферментный анализ (ИФА),
  • полимеразная цепная реакция (ПЦР).

Первый метод считается базовым анализом при диагностике любого заболевания. Если результаты подтверждают увеличение числа тромбоцитов и лимфоцитов и одновременное уменьшение количества эритроцитов и уровня гемоглобина, то они являются косвенным симптомом активности вируса в организме.

Второй метод позволяет проследить за текущим состоянием внутренних органов. Так как ВЭБ поражает печень, то особенное внимание уделяется изменению количества ферментов и белков, выделяемых ею. К ним относится трансаминазы, билирубин, щелочная фосфатаза. Их контроль позволяет предотвратить развитие желтухи как последствия токсического гепатита.

Третий метод исследует наличие в крови антител к молекулам вируса, называемых антигенами. Всего их существует 3 типа:

  • EA – ранний антиген,
  • VCA – капсидный антиген,
  • EBVA – ядерный антиген.

Для каждого антигена в организме формируются иммуноглобулины 2 классов – IgG и IgM.

Обнаружение IgG к ЕА говорит о первичном инфицировании и остром течении заболевания. Он присутствует в крови вплоть до полного исчезновения симптомов. Его повторное появление свидетельствует о рецидиве или хронической форме заболевания.

Антитела IgM к EA появляются в первую неделю и пропадают на 8-12 неделе после проявления первых симптомов. Если срок их присутствия в крови превышает это значение, то это свидетельствует о переходе болезни в хроническую форму. Повторное обнаружение сигнализирует о вторичном развитии инфекции.

Наличие антител IgM к VCA (антиген капсидного белка) сигнализирует о начале острой фазы болезни. Также они появляются в случае рецидива. Их продолжительное наличие в крови – симптом хронической формы заболевания.

Обнаружение антител класса IgG к капсидному белку свидетельствует о том, что ВЭБ активен в течение 8 недель после первичного инфицирования. Также, это говорит о наличии у человека иммунитета к этому штамму.

Антитела типа IgG к ядерному или нуклеарному антигену (EBNA) появляются ближе к стадии выздоровления больного. Они сохраняются в крови продолжительное время.

Если в крови отсутствуют антитела к ядерному антигену класса IgG, но присутствует IgM против капсиного белка, то это сигнализирует об остром развитии инфекции.

Кроме IgG и IgM в бланке с результатами иногда присутствует обозначение IgA. Оно свидетельствует о скрытой или хронической форме болезни при условии отсутствия антител класса IgM.

В зависимости от используемого лабораторией метода, в таблице с итогами исследования может присутствовать количественная величина, называемая индексом авидности к антигену. Она измеряется в процентах и позволяет определить время, прошедшее с момента появления инфекции.

Использование иммуноферментного анализа для диагностики у детей малоэффективно. Это связано с тем, что их иммунная система реагирует на возбудителя очень медленно.

Полимеразная цепная реакция – это процедура, в ходе которой из любой биологической жидкости больного выделяют ДНК вируса и сравнивают его с обширной вирусной базой. Этот способ точный, но малоэффективен на начальной стадии заболевания. Если взять материал для анализа в этот промежуток времени, то результат будет ложно-отрицательным.

Положительный результат такого обследования – веский аргумент для постановки конечного диагноза. Также этот способ позволяет обнаружить ВЭБ в организме ребенка.

Подготовка к процедуре

Чтобы повысить точность методов исследования крови нужно выполнить несколько простых требований:

  • сдать забор материалов на голодный желудок,
  • за 12 часов до процедуры следует отказаться от жирной пищи, алкоголя и курения,
  • прекратить приём противовирусных препаратов и антибиотиков,
  • детям младше 5 лет за 30 минут до сдачи крови выпить теплую кипяченую воду.

Ложные результаты

Все методы исследований, не являются точными на 100%. Поэтому и при выявлении ВЭБ могут случаться ошибки. Основной причиной может стать раннее обследование, когда инфекция находится в состоянии развития. В этом случае обычно назначается повторное обследование через 14 дней.

Другой помехой для точного результата является присутствие родственного штамма – цитомегаловируса или герпесвируса 6-го типа.

Влияние заболевания на организм беременной женщины и плода

Перед планируемой беременностью женщина должна пройти обследование, выясняющее текущее состояние иммунитета. Если были обнаружены антитела класса IgG, это означает, что во время беременности реактивация ВЭБ маловероятна. А анализы, подтверждающие наличие антител класса IgM, желательно не игнорировать, и перед зачатием лучше дождаться полного выздоровления.

Наличие активной формы ВЭБ в организме будущей матери может вызвать следующие патологии плода:

  • мертворождение,
  • выкидыш или преждевременные роды,
  • патологии развития нервной системы,
  • маточное кровотечение, сепсис.

Вирус Эпштейна-Барр является причиной множества заболеваний, затрагивающих работу всех систем и органов. Для его выявления используется иммуноферментный анализ и полимеразная цепная реакция. Если в ходе первого в крови будут найдены антитела к вирусу Эпштейна-Барр класса IgG, то этот положительный результат означает, что у человека заболевание протекает в острой форме, но у него есть иммунитет к этому штамму. Трактовка зависит от того, против какого антигена возникли антитела.

Вирус Эпштейна-Барр: диагностика инфекционного мононуклеоза

ВАЖНО!

Информацию из данного раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. В случае боли или иного обострения заболевания диагностические исследования должен назначать только лечащий врач. Для постановки диагноза и правильного назначения лечения следует обращаться к Вашему лечащему врачу.

Вирус Эпштейна-Барр относится к семейству герпесвирусов, подсемейство g-герпесвирусов — вирус герпеса человека IV типа. Вирусная частица состоит из нуклеоида, капсида и оболочки.
Нуклеоид содержит двухцепочечную ДНК, он окружен капсидом, состоящим из белковых субъединиц. Нуклеоид и капсид (нуклеокапсид) окружены липидсодержащей внешней оболочкой, образующейся из ядерной или наружной мембраны клетки-хозяина, в которую ещё до начала сборки вирусной частицы встраиваются некоторые вирусные белки. 
При инфицировании вирус проникает в эпителий ротоглотки и слюнных желёз человека и вызывает активную инфекцию с лизисом клеток и высвобождением вирусных частиц, в результате чего вирус обнаруживается в слюне. Кроме того, он может проникать в В-лимфоциты и эпителий носоглотки и вызывать латентную инфекцию. Вирус Эпштейна-Барр можно обнаружить в оральных секретах здоровых, но латентно инфицированных людей. Вирус тропен к В-лимфоцитам, Т-лимфоциты он не поражает. Проникнув в лимфоциты, вирус Эпштейна-Барр может вызывать их трансформацию, в результате которой образуются способные к неограниченной пролиферации клоны атипичных лимфоцитов, содержащие кольцевую вирусную ДНК в виде плазмиды. Рецептором вируса на эпителиальных клетках и В-лимфоцитах служит молекула CD21, которая служит также рецептором фрагмента комплемента C3d. Вирус запускает как гуморальный, так и клеточный ответ. Среди образующихся антител есть специфические к антигенам вируса и неспецифические, гетерофильные. Последние появляются в результате поликлональной активации В-лимфоцитов (это может быть причиной интерференции при проведении ряда серологических исследований у людей с активной инфекцией вирусом Эпштейна-Барр). Главную роль в элиминации данной инфекции играет клеточный иммунитет. При острой инфекции первичная репродукция вируса в В-лимфоцитах сменяется выраженной пролиферацией Т-лимфоцитов с соотношением CD4/CD8 меньше 1.

Острая инфекция вирусом Эпштейна-Барр известна под названиями инфекционный мононуклеоз, болезнь Филатова, моноцитарная ангина, идиопатическая железистая лихорадка, болезнь Афейффера, острый доброкачественный лимфобластоз.


Вирус Эпштейна-Барр — главная причина мононуклеоподобного синдрома (хотя острая первичная инфекция, вызванная этим вирусом, и инфекционный мононуклеоз не являются синонимами). Для острой инфекции характерно повышение температуры, боли в горле и увеличение заднешейных лимфоузлов (реже – переднешейных и локтевых, встречается генерализованное увеличение лимфоузлов). В 50% случаев выявляется увеличение селезенки, в 10 — 30% случаев – увеличение печени. Другими проявлениями инфекции могут быть сыпь и периорбитальный отек. Изредка наблюдаются осложнения, в том числе, неврологические, изменения со стороны системы крови в виде гемолитической или апластической анемии, нейтропении, тромбоцитопении. После перенесённого заболевания иногда подолгу сохраняется фарингит, увеличение лимфоузлов, утомляемость и неспособность концентрации внимания.
Заболевание малоконтагиозно. Инкубационный период (период активного размножения и распространения вируса по всей лимфоидной ткани) может длиться от 30 до 50 суток. Инфицирование данным вирусом в любом возрасте, а у детей особенно, в большинстве случаев может протекать бессимптомно или как респираторная инфекция. Доля серопозитивных лиц (имеющих специфические антитела к антигенам вируса) уже среди подростков в разных странах составляет от 50 до 90%, среди взрослых людей серологические признаки инфекции обнаруживаются почти в 100% случаев. Вирус выделяется со слюной, передается через поцелуи и другие контакты слизистой со слюной или загрязнёнными ею предметами. Трансплацентарная передача вируса происходит редко. Иммунитет при инфекционном мононуклеозе стойкий.
Хотя канцерогенность вируса окончательно не доказана, есть основания полагать, что он может играть роль в развитии ряда злокачественных новообразований – лимфомы Беркитта, рака носоглотки, лимфогранулематоза и ряда посттрансплантационных лимфопролиферативных синдромов. На фоне нарушения клеточного иммунитета (СПИД, иммуносупрессия при трансплантации и пр.) вирус Эпштейна — Барр может вызывать инфекционный мононуклеоз с летальным исходом или лимфопролиферативные синдромы с развитием В-клеточных лимфом. 
Лабораторная диагностика инфекционного мононуклеоза 
Диагностика инфекционного мононуклеоза основывается на клинической картине, характерных изменениях в клиническом анализе крови:
Ко второй неделе заболевания развивается относительный и абсолютный лимфоцитоз с присутствием 10 — 20% атипичных мононуклеаров. Гематологические изменения, напоминающие картину инфекционного мононуклеоза, могут наблюдаться и при цитомегаловирусной инфекции, токсоплазмозе, острых респираторных вирусных заболеваниях, ветряной оспе, кори, инфекционных гепатитах и других заболеваниях. Поэтому для постановки дифференциального диагноза целесообразно проведение серологических тестов. Антитела к антигенам вируса появляются достаточно быстро, и исследование в остром периоде заболевания даже однократное взятие сыворотки на разные виды антител может дать достаточно точное представление о наличии иммунитета или восприимчивости пациента к инфекции вирусом Эпштейна-Барр, текущей инфекции или реактивации.
Дополнительным подтверждением течения острых стадий инфекции может служить выявление ДНК вируса Эпштейна — Барр в крови и/или слюне методом ПЦР  

ПЦР-тестирование особенно полезно для выявления данной инфекции у новорождённых, когда серологические исследования мало информативны вследствие незрелости иммунной системы, а также в сложных и сомнительных случаях. 


Серологические тесты.

При литическом жизненном цикле вируса сначала появляются каскадом различные регуляторные белки ранней фазы (ранние антигены, early antigens, EA), к которым относятся используемые в различных тест-системах ЕА-D (p54), EA-R (p85), EA p138. Позже образуются структурные белки вируса — вирусные капсидные антигены (virus capsid antigens, VCA), мембранные белки (membrane antigens, MA). При латентной инфекции образуются только некоторые белки, в число которых входит Эпштейна-Барр ядерный (нуклеарный) антиген (Epstein-Barr nuclear antigens, EBNA, NA). Специфическая серологическая диагностика инфекции основана на использовании комбинации тестов, выявляющих наличие IgG и IgM антител к различным белкам-антигенам вируса, что позволяет дифференцировать инфекцию и уточнить стадию патологического процесса. В серологической диагностике острого мононуклеоза используется также тест на гетерофильные антитела.

ВАЖНО!

Информацию из данного раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. В случае боли или иного обострения заболевания диагностические исследования должен назначать только лечащий врач. Для постановки диагноза и правильного назначения лечения следует обращаться к Вашему лечащему врачу.


Информация проверена экспертом

Лишова Екатерина Александровна

Высшее медицинское образование, опыт работы — 19 лет

Анализ на вирус Эпштейна-Барр: методы диагностики и расшифровка

Вирус Эпштейна-Барр очень распространен в человеческой среде, им инфицировано больше половины населения. Проявления инфекции разнообразны. Она может протекать бессимптомно или вызывать серьезные патологии, которые приводят к летальному исходу. Поэтому анализ на вирус Эпштейна Барр имеет широкое применение в клинической практике и позволяет определить стадию течения заболевания и его активность.Анализ крови

Показания для диагностики

Чтобы назначить исследование крови, нужно определиться с показаниями для анализа и выбрать наиболее подходящий вид диагностики. Анализ крови назначают в таких случаях:

  • подтверждение инфекционного мононуклеоза;
  • увеличение затылочных, шейных, подчелюстных лимфоузлов;
  • симптомы, напоминающие мононуклеоз у лиц с иммуносупрессией, после химиотерапии, пересадки органов;
  • частые рецидивы воспалительных заболеваний ротоглотки;
  • профилактическое исследование;
  • гепатит неустановленной этиологии, а также увеличение печени и селезенки;
  • болезни желудочно-кишечного тракта, плохо поддающиеся стандартному лечению;
  • перенесенный мононуклеоз у женщин, планирующих беременность;
  • отягощенный акушерский анамнез, дети с врожденными пороками, мертворождения или самопроизвольные выкидыши;
  • дети с признаками внутриутробной инфекции или рожденные женщинами с высоким риском передачи болезни;
  • новорожденные с сепсисом, гепатитом, менингоэнцефалитом, пневмонией.


Для взрослых людей используют серологические тесты, направленные на определение различных классов антител. Также показательна полимеразная цепная реакция. Для новорожденных необходимо применять ПЦР, чтобы определить наличие ДНК вируса. В серологических тестах выявить IgM невозможно, иногда появляются IgA к некоторым ранним типам антител.

Подготовка к анализу

Правильная подготовка к анализу позволяет избежать сгущения крови и неверной интерпретации результатов. Основным исследуемым материалом является кровь, но для ПЦР может использоваться спинномозговая жидкость, слизь из носоглотки, соскоб клеток носоглотки, половых органов.

За сутки до анализа исключают алкоголь, жирную еду. Последний прием пищи должен быть не позднее 20:00. Кровь сдают натощак, при этом перед ее забором нельзя курить и следует отдохнуть около 15 минут. Если пациент принимает какие-либо лекарства, нужно прекратить это делать на время анализа, в остальных случаях достаточно предупредить лаборанта.

Ребенка до 5 лет нужно поить кипяченой водой на протяжении 30 минут до сдачи крови. Объем выпитого может достигать 200 мл.Подготовка к сдаче анализов

Серологическая диагностика

Для исследования необходимо сдавать венозную кровь. С помощью иммуноферментного анализа определяют различные классы иммуноглобулинов. Это специфические белки, которые вырабатываются клетками крови для нейтрализации и запоминания возбудителя. Они выводятся отдельно для различных пептидных структур вируса: капсида, ядра.

Расшифровать результаты анализа можно по порядку появления антител. Первыми в крови определяются IgM, они синтезируются к капсидному антигену (VCA) и появляются в период острой болезни. Исчезают иммуноглобулины через 4—6 недель от начала заболевания. При реактивации латентной инфекции эти антитела также появятся.

К капсидному антигену также выделяются IgG. Эти антитела сохраняются пожизненно, но при обострении болезни их количество увеличивается.

IgG к раннему антигену ЕА появляются с началом острой фазы болезни при первичном инфицировании, а также при реактивации. Их можно выявить через 1—2 недели после заражения, сохраняются они до 4 месяцев после выздоровления.

О перенесенной ранее инфекции говорит выявление ядерного антигена IgG EBNA. В крови они появляются только через 4—6 месяцев после начала заболевания. Даже при латентном течении болезни этот класс иммуноглобулинов выделяется в крови. Они не исчезают на протяжении всей жизни.

Расшифровка серологического анализа на вирус Эпштейна-Барр включает количественное определение антител. Каждая лаборатория использует свои тест-системы, в которых применяются различные нормы показателей. Поэтому расшифровывать конкретный анализ может только лечащий врач. Диагностику проводят в динамике, анализы назначают через 2 недели, затем еще через 4 и 6 недель, 3 и 6 месяцев. По нарастанию и убыванию типов и титров антител можно определить течение заболевания.

ПЦР

Метод лабораторного поиска направлен на выявление ДНК возбудителя. Предметом исследования становятся любые биологические жидкости, в том числе и моча, секрет простаты, слюна.

И у больных, и у носителей вируса исследование выявит его нуклеиновую кислоту. Поэтому для точности диагностики применяют анализ с заданной чувствительностью. Для носителей это до 10 копий в пробе, у больных должно быть 100 копий.

Ребенок до 3 лет имеет несформированный иммунитет, поэтому метод ПЦР является основным в диагностике вирусной инфекции.

Расшифровка заключения лаборатории не представляет сложности: положительный результат говорит о наличии вируса в организме, отрицательный — возбудителя нет.

Другие лабораторные исследования

Обнаружить измененные клетки, которые поражены ВЭБ, можно с помощью общего анализа крови. В мазке определяются атипичные мононуклеары, а также повышение общего уровня лейкоцитов и СОЭ, при норме 3,9—10,0*109 ед/л и 2—16 мм/ч соответственно. В некоторых случаях врачи ограничиваются анализом крови, чтобы поставить диагноз «инфекционный мононуклеоз».

Вирус поражает печень и селезенку, поэтому проводят печеночные пробы. Отклонения касаются повышения уровня трансаминаз, тимоловой пробы, общего билирубина и щелочной фосфотазы. Значительное увеличение показателей говорит о развитии осложнения мононуклеоза — токсического гепатита.

В некоторых случаях по показаниям назначают иммунограмму. Этот анализ определяет иммунный статус пациента, который может оказаться повышенным или пониженным. Результаты диагностики помогают выбрать подходящее лечение.

Расшифровка анализа на вирус эпштейн-барра — Вопрос инфекционисту

Здравствуйте! Нашему сыну 5,5 лет, рост примерно 110 см, вес — около 18 кг. Год назад начали появляться приступы болей в животе. Поначалу, боли могли начинаться в любое время без видимой причины, в течение одного дня, через какое-то время, боли начали появляться на фоне болезни (ОРВИ) и могли длиться по 2-3 дня, стул при этом регулярный, при болях, во время поглаживания живота рукой, чувствуется «бурная жизнь» там. Мы начали обследоваться, все анализы и исследования проводились у больного на тот момент ребёнка. Сдали ОАК с лейкоформулой (все в норме), Копрограмму, напишу только отклонения от нормы
Исследования кала. Физико-химическое исследование.
Запах — специфический, Стеркобилин — «+»
Микроскопическое исследование:
Мышечные волокна переваренные — «+-«,
Крахмал — «есть внеклеточно»,
Клетчатка переваримая — «+-«,
Клетчатка непереваримая — «++»,
кал на яйца глист 3 раза (не обнаружены), УЗИ брюшной полости, почек, мочевого пузыря, по УЗИ — печень, желч. Пузырь, поджелудочн. Железа, селезенка, всё в норме, в околопупочной области лоцируются брыжеечные лимф. Узлы склонные к слиянию, сниженной эхогенности, обычной стр-ры, разм. До 14×6 мм, размеры правой почки 72х30х28, левой — 70х33х30 (чашечно-лоханочная система расширена, сказали, возможно, из-за переполненного мочевого пузыря) и в заключении написано — Эхографические признаки панкреатопатии, дисхолии, лимфаденопатии, пиелоэктазии слева. Была рекомендована диета и медикаментозное лечение.
Через 4 мес. После лечения, на фоне новой болезни, опять начались боли в животе. Снова сдали анализы крови (всё в норме), осмотрел хирург (все в норме), сделали УЗИ брюшной полости, по УЗИ — стенки кишечника утолщены до 3,5 мм, мезентериальные лимф. Узлы множественные размером до 8 мм, обычной эхогенности, однородной стр-ры, селезенка увеличена 86х32 мм. Было рекомендовано: диета, консультации гематолога и гастроэнтеролога, контроль за размерами селезенки.
Перед консультацией к гематологу, сдали анализы крови, пишу только отклонения в анализах
Гемограмма
Индекс распределения эритроцитов (RDW-CV) — 14.6%, норма 11,5-14,5
Тромбокрит (РСТ) — 0,07%, норма 0,17-0,35
Нейтрофилы (NEUT%) — 35,7%, норма 38,0-59,0
Эозинофилы (EO) abs — 0.31 (10^9/л), норма 0,02-0,30
Врач-гематолог сказала, что «своих» болезней она у нас не видит, то же самое сказала и гастроэнтеролог и порекомендовала, через 3 мес. Повторить УЗИ брюшной полости у здорового ребенка, в случае если селезенка будет расширена, сдать анализ крови на АТ к токсоплазме, Эпштейн-Барр вирус, если анализы будут положительные, идти к инфекционисту.
Таким образом, спустя 4 мес., мы повторили УЗИ брюшной полости, по УЗИ (таким знаком -» ‘ » выделены те слова, которые не смогла точно прочитать, так как не уверена в правильности их прочтения, написано корявым почерком, может, всё-таки специалистам будет понятно, о чем речь) — Свободная жидкость в брюшной полости ‘на м/о’ не визуализируется, В правой ‘мезагастральной’ области визуализируется л/у размерами до 12х5,5 мм ‘в кол-ве до 8 мм с спиральной эхоструктурой’, незначительные признаки увеличения размеров селезенки — 85х30 мм. Остальное вроде в норме, как врач сказала. По рекомендации гастроэнтеролога, сразу решили сдать кровь на антитела. Результаты таковы:
Исследование крови на антитела методом ИФА
Антитела к Toxoplasma gondii IgG 0,6 отрицательный МЕ/мл
Антитела к Toxoplasma gondii IgM 0,26 отрицательный S/CO
Антитела к ядерному антигену вируса Эпштейн-Барр IgG (кач.) 21,23 положительный S/CO
Антитела к капсидному белку вируса Эпштейна-Барр IgM (кач.) 0,07 отрицательный S/CO
Буду очень признательна, если кто-нибудь сможет прокомментировать нашу ситуацию и рассказать о результатах наших последних анализов. А также откуда всё это могло взяться и на сколько всё это серьезно. С нетерпением и благодарностью жду любых ответов!

Расшифровка анализов ВЭБ — 35 ответов врачей на вопрос на сайте СпросиВрача